De Biologische Buffer Trometamol van Trisbasis 77-86-1

Biologische buffer Trometamol

Gebruik van Tris Buffer bij eiwitelektroforese en Western Blotting

De meeste SDS-PAGE-gels, lopende buffers en bufferbuffers worden met Tris gebufferd.Alle gemeenschappelijke buffers zijn verkrijgbaar voormengdOf, als je liever je eigen Tris buffer maakt, kun je beginnen met gezuiverd Tris poeder, glycine, en andere moleculaire biologie kwaliteit buffer reagentia.

De meeste SDS-gels gebruiken een discontinuus Tris buffer systeem. De stapelgel, die grote poriën heeft zodat grotere peptiden gemakkelijk door kunnen migreren, is meestal geformuleerd bij pH 6,7?? 6.8Bij deze pH migreren geïoniseerde chloride ionen snel, waardoor de pH achter hen stijgt en een spanningsgradiënt ontstaat met een zone van lage geleidbaarheid.die glycine (uit de loopende buffer) laat ioniseren en achter de chloridefront migreertDe meeste peptiden in het monster, die een negatieve lading hebben als gevolg van de gebonden SDS, migreren tussen de chloride en glycine, vormen een smalle band en worden dus "op elkaar gestapeld".

Zodra de stapel de oplosbare gel bereikt, die zich bevindt bij een hogere pH (typisch pH 8,7 – 8,8), zorgt de verhoogde ionisatie van de glycine ervoor dat deze versnelt en de peptiden inhaalt.de kleinere poriegrootte van de oplosbare gel begint een zeefef effect te hebben, wat resulteert in de scheiding van peptiden naar grootte.

De meeste westerse blottingprotocollen gebruiken een Tris buffer van lage ionensterkte voor eiwitoverdracht.

Gebruik van Trisbuffer bij nucleïnezuur-agarose-elektroforese

Tris buffers worden veel gebruikt voor DNA agarose elektroforese. De twee belangrijkste buffers zijn TBE (Tris borate/EDTA) en TAE (Tris acetate/EDTA).Hoewel er enige verschillen zijn in de resolutie van verschillende vormen van DNA en hun mobiliteit tijdens elektroforeseDe boraten ionen in TBE remmen veel enzymen, dus zonder een soort DNA-zuivering na elektroforese,sommige enzymgemedieerde manipulaties kunnen niet werkenDaarom wordt TAE-buffer in de meeste DNA-laboratoria voor dagelijks gebruik gebruikt.

Een Tris Buffer maken

Trisbuffer is een goede keuze voor de meeste biologische systemen omdat het een pKa van ongeveer 8,1 bij 25°C heeft, waardoor het een effectieve buffer is in het pH-bereik 7 ̊9.Dit pH-bereik is geschikt voor de meeste biologische processenTrispoeder is ook goedkoper en robuuster dan meer gespecialiseerde buffers zoals HEPES.

Er zijn twee manieren om een Tris buffer oplossing te maken.en voeg dan aliquoten van de ene oplossing (meestal Tris HCl) toe aan de andere oplossing (meestal Trisbasis) terwijl de pH wordt gecontroleerd totdat de juiste pH wordt verkregenIn de praktijk wordt dit zelden gedaan.

De gebruikelijke methode voor het maken van de meeste van de meest gebruikte Tris buffers is om te beginnen met alleen Tris basis.en dan is de buffer wordt gemaakt tot het gewenste volume. Veronderstelt men dat er geen overschrijding is bij het aanpassen van de pH, dan verandert deze methode de ionensterkte niet.of met Tris HCl en het aanpassen van de pH met NaOHAfhankelijk van het beoogde gebruik van de Trisbuffer kan een dergelijke verandering wel of niet belangrijk zijn.

Bij het maken van een Tris-buffer is het belangrijk om bij het aanpassen van de pH een Tris-compatibele elektrode te gebruiken.Eenvoudige verbindings-Ag/AgCl-elektroden kunnen instabiliteit vertonen wanneer ze met Tris-buffers worden gebruikt omdat het zilver geleidelijk de elektrode neerslaat en verstoptHet gebruik van dubbele verbindings- of calomelreferentie-elektroden zorgt voor nauwkeurige pH-metingen in de Tris-buffer.